Музей був відкритий 18 червня 1961 року. З перших днів існування він став одним з найбільш відвідуваних. Колекція музею постійно поповнювалася завдяки відомим письменникам, вченим і колекціонерам, які ділилися старими виданнями творів Пушкіна, портретами, картинами, гравюрами, унікальними автографами, меблями і предметами побуту. Тут проходять зустрічі з творчими та науковими працівниками, відкриті уроки, вечори пам’яті поета, консультації, книжкові та художні виставки. При музеї діє літературно-артистична школа "Пушкінський музейон", яка проводить серед дітей конкурси читців. Жителі Одеси називають установу "Музей-квартира Пушкіна" і "Пушкінський дім". Кожного гостя біля входу в будівлю музею зустрічає бронзовий пам’ятник поета.