Музей был открыт 18 июня 1961 года. С первых дней существования он стал одним из самых посещаемых. Коллекция музея постоянно пополнялась благодаря известным писателям, ученым и коллекционерам, которые делились старыми изданиями произведений Пушкина, портретами, картинами, гравюрами, уникальными автографами, мебелью и предметами быта. Здесь проходят встречи с творческими и научными работниками, открытые уроки, вечера памяти поэта, консультации, книжные и художественные выставки. При музее действует литературно-артистическая школа "Пушкинский музейон", которая проводит среди детей конкурсы чтецов. Жители Одессы называют учреждение "Музей-квартира Пушкина" и "Пушкинский домик". Каждого гостя у входа в здание музея встречает бронзовый памятник поэта.